ชุดการสกัด RNA ทั้งหมด MagBind Blood

 

ชื่อสินค้า	แมว. เลขที่	ข้อมูลจำเพาะ
ชุดการสกัด RNA ทั้งหมด MagBind Blood	G3611-50T	50 T

 

 

ชุดสกัด RNA ทั้งหมดจากเลือด MagBind ใช้เม็ดแม่เหล็กซุปเปอร์พาราแมกเนติกที่ออกแบบมาสำหรับการสกัดกรดนิวคลีอิกและการทำให้บริสุทธิ์ เพื่อสกัด RNA ทั้งหมดจากตัวอย่างเลือดสด ชุดนี้สามารถรับ RNA ที่มีความบริสุทธิ์สูงได้โดยการสลายเม็ดเลือดขาวเพื่อปล่อยกรดนิวคลีอิกในนั้นหลังจากกำจัดเซลล์เม็ดเลือดแดงด้วยสารละลายไลซิงที่ได้รับการปรับปรุงเป็นพิเศษ จากนั้นดูดซับ RNA ภายใต้เงื่อนไขบางประการด้วยเม็ดบีดแม่เหล็กซุปเปอร์พาราแมกเนติกที่มีเอฟเฟกต์การแยก และปล่อย RNA ที่ถูกดูดซับด้วยเม็ดบีดแม่เหล็ก หลังจากเปลี่ยนเงื่อนไขแล้ว RNA ที่สกัดออกมาสามารถนำมาใช้โดยตรงในการทดลองทางอณูชีววิทยาต่างๆ เช่น RT-PCR, RT-qPCR, Northern Blot, การแปลในหลอดทดลอง, การวิเคราะห์การป้องกัน RNase และการโคลนโมเลกุล

 

 

สารละลาย DNase,DTT จัดส่งพร้อมน้ำแข็งเปียก โดยเก็บไว้ที่ -20 องศา ; รีเอเจนต์อื่นๆ จะถูกขนส่งและเก็บไว้ที่อุณหภูมิห้อง มีอายุ 12 เดือน

 

 

หมายเลขส่วนประกอบ	ส่วนประกอบ	G3611-50T
G3611-1	10×บัฟเฟอร์สลายเซลล์สีแดง	60 มล
G3611-2	บัฟเฟอร์ BRL	30 มล
G3611-3	บัฟเฟอร์ RW1	12 มล. (เติมเอทานอลปราศจากน้ำ 18 มล. ก่อนใช้)
G3611-4	บัฟเฟอร์ RW2	20 มล. (เติมเอทานอลปราศจากน้ำ 80 มล. ก่อนใช้)
G3611-5	ลูกปัด SweMag	1 มล
G3611-6	ดีทีที โซลูชั่น	1.2 มล
G3611-7	ดีเนส	500 μL
G3611-8	10×บัฟเฟอร์ DNase	1 มล
G3611-9	น้ำที่ปราศจากนิวเคลียร์	12 มล
คู่มือ		หนึ่งสำเนา

 

 

1. หากมีการตกตะกอนเกิดขึ้นใน Buffer BRL โปรดละลายด้วยการให้ความร้อนที่ 37 องศา แล้วนำไปใช้หลังจากที่กลับสู่อุณหภูมิห้องแล้ว

2. เติมสารละลาย DTT ลงในบัฟเฟอร์ BRL ก่อนใช้กับความเข้มข้นสุดท้ายที่ 4% เช่น บัฟเฟอร์ BRL 1 มล. ถึงสารละลาย DTT 40 µL ไลซีนนี้เตรียมไว้อย่างดีที่สุดพร้อมใช้งาน และบัฟเฟอร์ BRL ที่เติมลงในโซลูชัน DTT สามารถเก็บไว้ที่อุณหภูมิ 4 องศาเป็นเวลา 1 เดือน

3. ก่อนใช้งาน ให้เติมเอธานอลสัมบูรณ์ 18 มล. ลงในบัฟเฟอร์ RW1 จากนั้นเติมเอธานอลสัมบูรณ์ 80 มล. ลงในบัฟเฟอร์ RW2 แล้วผสมให้เข้ากัน

4. ต้องใช้ขาตั้งแม่เหล็กแต่ไม่ได้ให้มาในชุดนี้

 

 

1. การเจือจางบัฟเฟอร์ไลซิสเซลล์เม็ดเลือดแดง 10×บัฟเฟอร์ไลซิสเซลล์สีแดง: เจือจางเป็นบัฟเฟอร์ไลซิสเซลล์เม็ดเลือดแดง 1×ด้วย ddH2O ที่ปราศจาก RNase (เช่น ใช้ 140 μL ของ 10×Red cell Lysis Buffer หากปริมาตรของตัวอย่างเลือดที่จะรักษาคือ 200 μL)

2. เติมบัฟเฟอร์ไลซิสเซลล์สีแดง 1 ปริมาตร 5 ปริมาตรลงในเลือดครบส่วนสด 1 ปริมาตร และผสมให้เข้ากัน (ตัวอย่างเช่น เติมบัฟเฟอร์ไลซิสเซลล์สีแดง 1 มล. หากปริมาตรของตัวอย่างเลือดคือ 200 ไมโครลิตร)

3. ฟักบนน้ำแข็งเป็นเวลา 15 นาที และผสมกลับด้านเป็นเวลา 2-3 ครั้งในระหว่างการฟักไข่

หมายเหตุ: ในระหว่างการฟักตัว ส่วนผสมจะโปร่งแสง แสดงว่าเซลล์เม็ดเลือดแดงถูกทำลายอย่างสมบูรณ์ ขึ้นอยู่กับระดับของการสลายของตัวอย่างเลือด ระยะเวลาในการฟักตัวสามารถขยายได้ถึง 20 นาที

4. ปั่นแยกที่ 3,000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 10 นาทีที่ 4 องศาเพื่อเอาส่วนที่ลอยออกไปจนหมด

หมายเหตุ: โปรดอย่าดูดตะกอนของเม็ดเลือดขาว

5. เพิ่ม 1× Red cell Lysis Buffer 2 เท่าของปริมาตรของตัวอย่างเลือดลงในเม็ดโลหิตขาวตกตะกอน (เช่น หากปริมาตรของตัวอย่างเลือดคือ 200 µL ก็ควรเติม 400 µL ของ 1×Red cell Lysis Buffer) เพื่อระงับ เม็ดเลือดขาวจะตกตะกอน

6. ปั่นเหวี่ยงที่ 3,000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 10 นาทีที่ 4 องศาเพื่อเอาส่วนที่ลอยออกไปจนหมด อย่าสำลักเม็ดโลหิตขาวตกตะกอน

7. เติมบัฟเฟอร์เม็ดเลือดขาวชนิดแขวนลอย BRL ตามปริมาตรตัวอย่างเลือด (ตรวจสอบให้แน่ใจว่าได้เติมสารละลาย DTT ก่อนใช้งาน) หากปริมาตรของตัวอย่างเลือดน้อยกว่า 0.5 มล. จะมีการเติมบัฟเฟอร์ BRL 400 μL หากปริมาตรของตัวอย่างเลือดคือ 0.5-1.5 มล. ให้เติมบัฟเฟอร์ BRL 600 ไมโครลิตร

8. เติมไอโซโพรพานอล 2/3 ปริมาตรลงในหลอดหมุนเหวี่ยง ผสมกลับด้านและผสมลง จากนั้นเติมเม็ดบีด SweMag 20 ไมโครลิตรลงในส่วนผสม (ลูกปัด SweMag จะต้องแขวนลอยใหม่ทั้งหมดและกระจายให้เท่าๆ กันก่อนใช้งาน) และผสมให้เข้ากันกับปิเปต

9. ยืนที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 10 นาที และผสมให้เข้ากันกับปิเปต 3-5 ครั้งระหว่างการวาง

10. วางหลอดหมุนเหวี่ยงบนขาตั้งแม่เหล็กเป็นเวลา 30 วินาที จากนั้นค่อยๆ หมุนหลอดหมุนเหวี่ยงขึ้นและลงหลายๆ ครั้งพร้อมกับขาตั้งแม่เหล็กเพื่อล้างเม็ดแม่เหล็กที่หลงเหลืออยู่บนผนังของหลอด จากนั้นดูดและทิ้งส่วนที่ลอยเหนือตะกอนเมื่อใส

11. เติมบัฟเฟอร์ RW1 500 µL แล้วปิเปตขึ้นและลงเบาๆ เพื่อแขวนเม็ดแม่เหล็กกลับคืน จากนั้นวางท่อไว้บนแท่นแม่เหล็กเป็นเวลา 30 วินาที จากนั้นค่อยๆ หมุนหลอดหมุนเหวี่ยงขึ้นและลงหลายๆ ครั้งพร้อมกับขาตั้งแม่เหล็กเพื่อล้างเม็ดแม่เหล็กที่หลงเหลืออยู่บนผนังของหลอด จากนั้นดูดและทิ้งส่วนที่ลอยเหนือตะกอนเมื่อใส

12. เติม Buffer RW2 500 µL ถอดขาตั้งแม่เหล็กออก ปิเปตขึ้นและลงเบาๆ เพื่อแขวนเม็ดบีดแม่เหล็กกลับคืน จากนั้นวางท่อไว้บนแท่นแม่เหล็กเป็นเวลา 30 วินาที จากนั้นค่อยๆ หมุนหลอดหมุนเหวี่ยงขึ้นและลงหลายๆ ครั้งพร้อมกับขาตั้งแม่เหล็กเพื่อล้างเม็ดแม่เหล็กที่หลงเหลืออยู่บนผนังของหลอด จากนั้นดูดและทิ้งส่วนที่ลอยเหนือตะกอนเมื่อใส

13. ถอดขาตั้งแม่เหล็กสำหรับการย่อย DNase I:

ก. เตรียมวิธีแก้ปัญหาการทำงานของ DNase I: นำบัฟเฟอร์ 10×DNase 10 ไมโครลิตร, DNase 10 ไมโครลิตร, น้ำปลอดนิวคลีเอส 80 ไมโครลิตร และผสมให้เข้ากันในหลอดหมุนเหวี่ยงไร้นิวเคลียส

ข. เติมสารละลายทำงาน DNase I 100 µL ลงในหลอดที่มีเม็ดบีดแม่เหล็ก และปิเปตขึ้นและลงเบาๆ เพื่อแขวนเม็ดบีดแม่เหล็กกลับคืน ยืนที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 15 นาที และผสมให้เข้ากันทุกๆ 5 นาทีในระหว่างการฟักตัว

ค. หลังจากการย่อย DNase I ให้เติมบัฟเฟอร์ RW2 600 µL แล้วปิเปตขึ้นและลงเบาๆ เพื่อแขวนเม็ดบีดแม่เหล็กกลับคืน จากนั้นวางท่อไว้บนแท่นแม่เหล็กเป็นเวลา 30 วินาที จากนั้นค่อยๆ หมุนหลอดหมุนเหวี่ยงขึ้นและลงหลายๆ ครั้งพร้อมกับขาตั้งแม่เหล็กเพื่อล้างเม็ดแม่เหล็กที่หลงเหลืออยู่บนผนังของหลอด จากนั้นดูดและทิ้งส่วนที่ลอยเหนือตะกอนเมื่อใส

14. ทำซ้ำขั้นตอนที่ 12

15. เปิดฝาหลอดสำหรับการหมุนเหวี่ยง ทิ้งไว้ที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 5-10 นาทีเพื่อให้แน่ใจว่าเอทานอลที่ตกค้างจะระเหยออกไปโดยสมบูรณ์ (อย่าปล่อยให้แห้งเพื่อหลีกเลี่ยงผลกระทบต่อผลผลิตกรดนิวคลีอิก)

16. ถอดขาตั้งแม่เหล็ก เติมน้ำปลอดนิวคลีเอส 30–50 ไมโครลิตร แล้วปิเปตขึ้นและลงเบาๆ เพื่อให้เม็ดแม่เหล็กแขวนลอยอีกครั้ง ยืนที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 5 นาที

17. วางท่อไว้บนขาตั้งแม่เหล็กเพื่อเก็บเม็ดบีดไว้ที่ด้านข้างของท่อ จากนั้นดูดส่วนเหนือตะกอนเข้าไปในหลอดหมุนเหวี่ยงที่ปราศจากนิวเคลียสใหม่เพื่อให้ได้ RNA ที่มีความบริสุทธิ์สูง

 

 

1. โปรดอ่านคู่มือผลิตภัณฑ์อย่างละเอียดก่อนใช้งาน

2. ปริมาณตัวอย่างสูงสุดของชุดอุปกรณ์นี้คือ 1.5 มล. (จำนวน WBC 1×107) และปริมาณเลือดที่ใช้สามารถลดลงได้ตามสัดส่วนหากเลือดมีปริมาณเม็ดเลือดขาวสูง

3. ชุดนี้เหมาะสำหรับการทำให้บริสุทธิ์ RNA ในเลือดที่เก็บรักษาไว้โดยสารต้านการแข็งตัวของเลือดแบบเดิม (รวมถึงเฮปารินโซเดียม, EDTA, โซเดียมซิเตรต ฯลฯ )

4. การระงับลูกปัดแม่เหล็กควรหลีกเลี่ยงการแช่แข็งระหว่างการเก็บรักษา เม็ดแม่เหล็กติดง่าย และควรเขย่าให้เพียงพอเพื่อให้เม็ดบีดมีสารแขวนลอยสม่ำเสมอก่อนใช้งาน

5. ก่อนที่จะเพิ่มเม็ดแม่เหล็ก ต้องผสมรีเอเจนต์อื่นๆ ให้เข้ากัน

6. เอทานอลควรระเหยได้อย่างสมบูรณ์ก่อนที่จะชะล้าง RNA เพื่อหลีกเลี่ยงเอทานอลที่ตกค้างซึ่งส่งผลต่อการทดลองขั้นปลายน้ำ

7. อย่าทำให้เม็ดบีดแห้งเป็นเวลานานเพราะอาจส่งผลต่อประสิทธิภาพการชะล้าง RNA

8. สวมเสื้อกาวน์แล็บ ถุงมือแบบใช้แล้วทิ้ง หน้ากาก หลีกเลี่ยงการพูดคุย และใช้ทิปและหลอดหมุนเหวี่ยงที่ปราศจากนิวเคลียร์

9. ควรใช้ม้านั่งในห้องปฏิบัติการเฉพาะทางและอุปกรณ์อิเล็กโตรโฟรีซิสสำหรับการจัดการ RNA

 

สำหรับใช้ในการวิจัยเท่านั้น!

 

 

ป้ายกำกับยอดนิยม: ชุดสกัด rna รวมเลือด magbind ประเทศจีน ผู้ผลิตชุดสกัด rna รวมเลือด magbind ซัพพลายเออร์ โรงงาน