ชุดสกัด RNA ในเลือดทั้งหมด

 

ชื่อสินค้า	แมว. เลขที่	ข้อมูลจำเพาะ
ชุดสกัด RNA ในเลือดทั้งหมด	G3636-50T	50 T

 

 

ชุดนี้เหมาะสำหรับการสกัด RNA ทั้งหมดจากตัวอย่างเลือดสด คอลัมน์แบบหมุนเหวี่ยงใหม่ที่มีบัฟเฟอร์สลายเฉพาะสามารถใช้เพื่อกู้คืน RNA รวมของเลือดที่มีความบริสุทธิ์สูงได้อย่างมีประสิทธิภาพ โดยไม่จำเป็นต้องใช้ฟีนอล คลอโรฟอร์ม และรีเอเจนต์อื่นๆ และสามารถแยก RNA ทั้งหมดออกจากเลือดครบส่วนน้อยกว่า 1.5 มล. ได้อย่างรวดเร็ว และกำจัดโปรตีนที่ไม่บริสุทธิ์ได้อย่างมีประสิทธิภาพ ในเวลาเพียง 1 ชั่วโมง RNA ที่สกัดออกมาสามารถนำมาใช้โดยตรงในการทดลองทางอณูชีววิทยาต่างๆ เช่น RT-PCR, RT-qPCR, การผสมพันธุ์ทางเหนือ, การแปลในหลอดทดลอง, การวิเคราะห์การป้องกัน RNase และการโคลนโมเลกุล

 

 

สารละลาย DNase,DTT จัดส่งพร้อมน้ำแข็งเปียก โดยเก็บไว้ที่ -20 องศา ; รีเอเจนต์อื่นๆ จะถูกขนส่งและเก็บไว้ที่อุณหภูมิห้อง มีอายุ 12 เดือน

 

 

หมายเลขส่วนประกอบ	ส่วนประกอบ	G3636-50T
G3636-1	10×บัฟเฟอร์สลายเซลล์สีแดง	60 มล
G3636-2	บัฟเฟอร์ RL	30 มล
G3636-3	บัฟเฟอร์ RW1	12 มล. (เติมเอทานอลปราศจากน้ำ 18 มล. ก่อนใช้)
G3636-4	บัฟเฟอร์ RW2	20 มล. (เติมเอทานอลปราศจากน้ำ 80 มล. ก่อนใช้)
G3636-5	ดีเนส	250 μL
G3636-6	10×บัฟเฟอร์ DNase	500 μL
G3636-7	ดีทีที โซลูชั่น	1.2 มล
G3636-8	น้ำที่ปราศจากนิวเคลียร์	12 มล
G3636-9	คอลัมน์หมุนยางลบ gDNA	50 ชุด
G3636-10	คอลัมน์หมุน RNA	50 ชุด
คู่มือ		หนึ่งสำเนา

 

 

1. ถ้าเกิดตะกอนใน Buffer RL ให้อุ่นที่อุณหภูมิ 37 องศา จนตะกอนละลายหมด แล้วจึงกลับคืนสู่อุณหภูมิห้องเพื่อใช้

2. ก่อนดำเนินการ ให้เติมสารละลาย DTT ลงในบัฟเฟอร์ RL จนถึงความเข้มข้นสุดท้ายที่ 4% เช่น สารละลาย DTT 40 µL ต่อบัฟเฟอร์ RL 1 มล. ไลซีนนี้ใช้ได้ดีที่สุดตามที่เป็นอยู่ และบัฟเฟอร์ RL พร้อมสารละลาย DTT สามารถทิ้งไว้ที่อุณหภูมิ 4 องศาได้นานถึงหนึ่งเดือน

3. ก่อนใช้งานครั้งแรก ให้เติมเอธานอลสัมบูรณ์ 18 มล. ลงในบัฟเฟอร์ RW1 และเติมเอธานอลสัมบูรณ์ 72 มล. ลงในบัฟเฟอร์ RW2

4. เตรียมเอทานอล 70% ด้วยน้ำ DEPC ก่อนใช้งาน

 

 

1. ระเบียบปฏิบัติ/ขั้นตอนการทดสอบ

2. การเจือจางบัฟเฟอร์ไลซิสเซลล์เม็ดเลือดแดง 10×บัฟเฟอร์ไลซิสเซลล์สีแดง: เจือจางเป็นบัฟเฟอร์ไลซิสเซลล์เม็ดเลือดแดง 1×ด้วยน้ำที่ปราศจากนิวคลีเอส (เช่น ใช้ 140 μL ของ 10×Red cell Lysis Buffer หากปริมาตรของตัวอย่างเลือดที่จะรักษาคือ 200 μL)

3. เติมบัฟเฟอร์ไลซิสเซลล์สีแดง 1 ปริมาตร 5 ปริมาตรลงในตัวอย่างเลือด 1 ปริมาตร และผสมให้เข้ากัน (ตัวอย่างเช่น เติมบัฟเฟอร์ไลซิสเซลล์สีแดง 1 มล. หากปริมาตรของตัวอย่างเลือดคือ 200 ไมโครลิตร)

4. ฟักบนน้ำแข็งเป็นเวลา 15 นาที และผสมกลับด้านเป็นเวลา 2-3 ครั้งในระหว่างการฟักไข่

5. หมายเหตุ: ในระหว่างการฟักตัว ส่วนผสมจะโปร่งแสง แสดงว่าเซลล์เม็ดเลือดแดงถูกทำลายอย่างสมบูรณ์ ขึ้นอยู่กับระดับของการสลายของตัวอย่างเลือด ระยะเวลาในการฟักตัวสามารถขยายได้ถึง 20 นาที

6. ปั่นเหวี่ยงที่ 3,000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 10 นาทีที่ 4 องศาเพื่อเอาส่วนที่ลอยออกไปจนหมด

7. หมายเหตุ: โปรดอย่าดูดเม็ดเม็ดเลือดขาว

1. เพิ่ม 1× Red Cell Lysis Buffer ลงใน 2 เท่าของปริมาตรของตัวอย่างเลือดลงในเม็ดเม็ดเลือดขาว (เช่น เมื่อปริมาตรของตัวอย่างเลือดคือ 200 μL ต้องเติม 400 μL ของ 1× Red Cell Lysis Buffer) เพื่อระงับ เม็ดเม็ดเลือดขาว)

2. ปั่นเหวี่ยงที่ 3,000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 10 นาทีที่ 4 องศาเพื่อเอาส่วนลอยเหนือตะกอนออกทั้งหมด กรุณาอย่าดูดเม็ดเม็ดเลือดขาว

3. แขวนเม็ดเม็ดเลือดขาวอีกครั้งโดยเติม Buffer RL (ต้องแน่ใจว่าได้เติม DTT Solution ก่อนใช้งาน) หากปริมาตรของตัวอย่างเลือดน้อยกว่า 0.5 มล. ให้เติมบัฟเฟอร์ RL 400 μL หากปริมาตรของตัวอย่างเลือดคือ 0.5-1.5 มล. ให้เติมบัฟเฟอร์ RL 600 ไมโครลิตร

2. ถ่ายโอนสารละลายข้างต้นไปยังคอลัมน์หมุนของยางลบ gDNA ปั่นแยกที่ 12,000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 2 นาทีที่อุณหภูมิห้อง ทิ้งคอลัมน์หมุนยางลบ gDNA และเก็บการไหลผ่านไว้ในหลอดรวบรวม

3. เติมเอทานอล 70% ในปริมาตรเท่ากัน (ตะกอนที่มองเห็นได้ซึ่งอาจก่อตัวหลังจากเติมเอทานอล 70%) ลงในการไหลผ่านในท่อรวบรวมและปิเปตขึ้นและลงเพื่อผสมให้เข้ากัน

4. ถ่ายส่วนผสมข้างต้นทั้งหมด (รวมถึงตะกอน) ไปยังคอลัมน์หมุน RNA โดยเติมครั้งละไม่เกิน 600 µL หรือเป็นชุดหากมากกว่า 600 µL

5. ปั่นแยกที่ 12,000 × rpm เป็นเวลา 30 วินาทีที่อุณหภูมิห้อง ทิ้งการไหลผ่าน และใส่ RNA Spin Column ลงในหลอดรวบรวมเดิมอีกครั้ง

6. เติมบัฟเฟอร์ RW1 500 μL ลงในเครื่องหมุนเหวี่ยงคอลัมน์หมุน RNA ที่ 12,000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 30 วินาทีที่อุณหภูมิห้อง และทิ้งการไหลที่ไหลผ่าน และใส่ RNA Spin Column ลงในหลอดคอลเลกชันเดียวกันอีกครั้ง

7. เพิ่มบัฟเฟอร์ RW2 500 μL ลงใน RNA Spin Columns (บัฟเฟอร์ RW2 จะถูกเพิ่มตามผนังของ RNA Spin Column เพื่อช่วยชะล้างเกลือที่ตกค้าง) ปั่นเหวี่ยงที่ 12,000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 30 วินาทีที่อุณหภูมิห้อง และทิ้งการไหลที่ไหลผ่าน จากนั้นใส่ RNA Spin Column ลงในหลอดคอลเลกชันเดียวกันอีกครั้ง

8. (ทางเลือก) การย่อยด้วย DNase:

ก. เตรียมสารละลายสำหรับการทำงานของ DNase: ผสม 5 µL ของ 10× DNase Buffer, 5 µL ของ DNase และ 40 µL ของน้ำที่ปราศจากนิวคลีเอส ในหลอดหมุนเหวี่ยงที่ปราศจากนิวคลีเอส

ข. ปิเปตส่วนผสม DNase ทั้งหมด 50 ไมโครลิตรไปที่กึ่งกลางของเมมเบรน RNA Spin Column ฟักที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 15 นาที

9. เพิ่มบัฟเฟอร์ RW2 600 μL ลงในคอลัมน์หมุน RNA ปั่นเหวี่ยงที่ 12,000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 30 วินาทีที่อุณหภูมิห้อง และทิ้งการไหลที่ไหลผ่าน จากนั้นใส่ RNA Spin Column ลงในหลอดคอลเลกชันเดียวกันอีกครั้ง

11. ทำซ้ำขั้นตอนที่ 13

12. ปั่นเหวี่ยงคอลัมน์ที่ 12,000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 2 นาทีเพื่อเอาของเหลวที่ตกค้างออก

13. ทิ้งการไหลผ่านและหลอดเก็บตัวอย่าง แล้วใส่ RNA Spin Column ลงในหลอดสำหรับการหมุนเหวี่ยงแบบไม่มีนิวคลีเอสขนาด 1.5 มล. หลอดใหม่ บ่มที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 3-5 นาทีเพื่อระเหยเอทานอลที่ตกค้างใน RNA Spin Column ออกไปจนหมด

14. เติมน้ำปลอดนิวคลีเอส 30-50 μL ไปที่ศูนย์กลางเมมเบรนของคอลัมน์หมุน RNA ฟักที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 5 นาที ปั่นแยกคอลัมน์เป็นเวลา 2 นาทีที่ 12,000 รอบต่อนาทีที่อุณหภูมิห้องเพื่อชะ RNA เพื่อให้ได้ความเข้มข้นของ RNA ที่สูงขึ้น ให้เติมสารชะชนิดแรกกลับเข้าไปในคอลัมน์หมุน RNA ยืนไว้ 5 นาทีที่อุณหภูมิห้องและปั่นแยกที่ 12,000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 2 นาทีที่อุณหภูมิห้อง แล้วเก็บ RNA อีกครั้ง .

 

 

1. โปรดอ่านคู่มือผลิตภัณฑ์อย่างละเอียดก่อนใช้งาน

2. ปริมาณตัวอย่างสูงสุดของชุดอุปกรณ์นี้คือ 1.5 มล. (จำนวน WBC 1×107) ซึ่งสามารถลดลงได้ตามสัดส่วนหากมีเม็ดเลือดขาวในเลือดสูง

3. ชุดนี้เหมาะสำหรับการทำให้บริสุทธิ์ RNA ในเลือดที่เก็บรักษาไว้โดยสารต้านการแข็งตัวของเลือดแบบเดิม (รวมถึงเฮปารินโซเดียม, EDTA, โซเดียมซิเตรต ฯลฯ )

4. สวมเสื้อกาวน์แล็บ ถุงมือแบบใช้แล้วทิ้ง หน้ากาก หลีกเลี่ยงการพูดคุย และใช้ทิปและหลอดหมุนเหวี่ยงที่ปราศจากนิวเคลียร์

5. ควรใช้ม้านั่งในห้องปฏิบัติการเฉพาะทางและอุปกรณ์อิเล็กโตรโฟรีซิสสำหรับการจัดการ RNA

 

สำหรับใช้ในการวิจัยเท่านั้น!

 

 

ป้ายกำกับยอดนิยม: ชุดสกัด rna ทั้งหมดในเลือด ประเทศจีน ผู้ผลิตชุดสกัด rna ทั้งหมดในเลือด ซัพพลายเออร์ โรงงาน