SweMagrose IDA-Co เม็ดอะกาโรสแม่เหล็กสำหรับการทำให้โปรตีน His-Tag บริสุทธิ์

 

ชื่อสินค้า	แมว. เลขที่	ข้อมูลจำเพาะ
SweMagrose IDA-Co เม็ดอะกาโรสแม่เหล็กสำหรับการทำโปรตีน His-Tag ให้บริสุทธิ์	ก3655-1มล	1 มล
	ก3655-5มล	5 มล

 

 

ผลิตภัณฑ์นี้เตรียมจากเม็ดแม่เหล็กอะกาโรสที่ดัดแปลงโดย IDA และไอออนนิกเกิลที่เป็นคีเลต สามารถทำให้โปรตีนที่ติดแท็กฮิสทิดีนในตัวอย่างทางชีววิทยาบริสุทธิ์ได้อย่างมีประสิทธิภาพและรวดเร็วโดยไม่ต้องกรองแบบแรงเหวี่ยง การดำเนินการนี้ง่ายและเหมาะสำหรับการทำให้โปรตีนแท็กฮิสทิดีนที่ละลายน้ำได้บริสุทธิ์ซึ่งแสดงออกในส่วนเหนือตะกอนหรือเซลล์ของแบคทีเรีย ยีสต์ และเซลล์ นอกจากนี้ยังสามารถใช้ร่วมกับอุปกรณ์ทำให้บริสุทธิ์โปรตีนที่มีปริมาณงานสูงสำหรับการคัดกรองและการแยกโปรตีน

Co2+ มีลิแกนด์ 4 ตัวและการดูดซับที่ไม่เฉพาะเจาะจงน้อยกว่า Ni2+ มีลิแกนด์ 6 ตัวและมีความสามารถในการจับกับโปรตีนที่แข็งแกร่ง สำหรับโปรตีนเป้าหมายที่มากขึ้น คุณสามารถเลือกเม็ดอะกาโรสแม่เหล็ก SweMagrose IDA-Ni อื่นๆ ของเราสำหรับของเขา -แท็กโปรตีนบริสุทธิ์ (G3654)

 

 

จัดส่งด้วยน้ำแข็งเปียก เก็บที่อุณหภูมิ 4 องศา มีอายุ 12 เดือน

 

 

หมายเลขส่วนประกอบ	ส่วนประกอบ	ก3655-1มล	ก3655-5มล
G3655	SweMagrose IDA-Co เม็ดอะกาโรสแม่เหล็กสำหรับการทำโปรตีน His-Tag ให้บริสุทธิ์	1 มล	5 มล
คู่มือ		1 ชิ้น

 

 

1. การกำหนดค่าของรีเอเจนต์ต่างๆ สามารถอ้างอิงได้ดังนี้ ผู้ใช้สามารถเลือกปริมาณเม็ดแม่เหล็กและสูตรบัฟเฟอร์ที่เหมาะสมตามสถานการณ์ของรีเอเจนต์

ส่วนประกอบ	ปริมาณ
10×PBS(โซเดียม ฟอสเฟต 200 มิลลิโมลาร์, pH7.4)	50 มล
10x บัฟเฟอร์อิมิดาโซล (โซเดียมฟอสเฟต 200 มิลลิโมลาร์, อิมิดาโซล 5 โมลาร์, pH7.4)	50 มล
เครื่องกำจัดโคบอลต์(ทริส-HCl 10 มิลลิโมลาร์, NaCl 500 มิลลิโมลาร์, EDTA 100 มิลลิโมลาร์, pH7.4)	10 มล
น้ำยาล้างอัลคาไลน์ (0.5 M NaOH, 2 M NaCl)	10 มล
href="จาวาสคริปต์:;" โคบอลตัสซัลเฟต(100 มิลลิโมลาร์ CoSO4)	15 มล
สารละลายถนอมอาหาร (เอทานอล 20%)	50 มล

 

2. การกำหนดค่าบัฟเฟอร์

ประสิทธิภาพการจับตัวของโปรตีนเป้าหมายด้วยเม็ดบีดคีเลตไอออนของโลหะจะส่งผลโดยตรงต่อประสิทธิภาพการทำให้บริสุทธิ์ของโปรตีนเป้าหมาย และบัฟเฟอร์ต่างๆ จะส่งผลต่อการฟื้นตัวและความบริสุทธิ์ของโปรตีนเป้าหมายในระดับหนึ่งด้วย ดังนั้น ก่อนที่จะทำให้โปรตีนบริสุทธิ์ในวงกว้าง ผู้ใช้ควรออกแบบการทดลองของตนเองเพื่อคัดกรองบัฟเฟอร์ที่เหมาะสมสำหรับโปรตีนเป้าหมาย รวมถึงบัฟเฟอร์สำหรับจับ บัฟเฟอร์สำหรับล้าง และบัฟเฟอร์สำหรับชะล้าง ระบบบัฟเฟอร์ที่ให้ไว้ด้านล่างเหมาะสำหรับการทำให้โปรตีนแท็กฮิสทิดีนส่วนใหญ่บริสุทธิ์ สำหรับการอ้างอิงของผู้ใช้:

บัฟเฟอร์การจับ:โซเดียม ฟอสเฟต 20 มิลลิโมลาร์, NaCl 500 มิลลิโมลาร์, อิมิดาโซล 5~50 มิลลิโมลาร์, pH7.4

บัฟเฟอร์ล้าง:โซเดียมฟอสเฟต 20 มิลลิโมลาร์, NaCl 500 มิลลิโมลาร์, อิมิดาโซล 50~100 มิลลิโมลาร์, pH7.4

บัฟเฟอร์การชะล้าง:โซเดียม ฟอสเฟต 20 มิลลิโมลาร์, NaCl 500 มิลลิโมลาร์, อิมิดาโซล 500 มิลลิโมลาร์, pH7.4

3. การรักษาตัวอย่าง

ก) อี. โคไล ยีสต์ และโปรตีนที่แสดงออกภายในเซลล์อื่นๆ: เติม Binding Buffer 5~10 มล. ต่อกรัมของเซลล์ เพิ่มตัวยับยั้งโปรตีเอส (เช่น PMSF ที่ความเข้มข้นสุดท้าย 1 มิลลิโมลาร์) ให้เซลล์แขวนลอยอีกครั้ง และทำการสลายด้วยคลื่นเสียงความถี่สูง เซลล์ในอ่างน้ำแข็ง กล่าวคือ ตัวอย่างโปรตีนหยาบ หากตัวอย่างมีความหนืดเกินไป สามารถเติมนิวคลีเอสในปริมาณที่เหมาะสมลงในตัวอย่างน้ำมันดิบได้ตามต้องการ และวางไว้บนน้ำแข็งเป็นเวลา 30 นาทีเพื่อทำให้กรดนิวคลีอิกเสื่อมสภาพ อีกทางหนึ่ง สามารถทำการปั่นเหวี่ยงตัวอย่างโปรตีนได้ตามต้องการ

b) โปรตีนที่แสดงออกภายนอกเซลล์: ได้รับตัวอย่างโปรตีนที่หยาบเมื่อส่วนลอยเหนือตะกอนของการแสดงออกภายนอกเซลล์ถูกเจือจางด้วยบัฟเฟอร์การจับในปริมาณที่เท่ากัน

c) โปรตีนที่แสดงออกภายในเซลล์ในเซลล์สัตว์: นำเซลล์สัตว์ในปริมาณที่เหมาะสม ล้างด้วย PBS ในปริมาณที่เหมาะสม (จัดเตรียมเอง) หนึ่งครั้ง ทิ้งส่วนที่ลอยเหนือตะกอน แล้วแขวนลอยใหม่ด้วย Binding Buffer ที่มี 1% (v/v) Triton X ในปริมาณที่เหมาะสม -100 หรือ 1% (v/v) NP-40 เติมตัวยับยั้งโปรตีเอส (เช่น PMSF ที่ความเข้มข้นสุดท้ายที่ 1 มิลลิโมลาร์) และวางไว้บนน้ำแข็งเป็นเวลา 10 นาที นั่นคือตัวอย่างโปรตีนดิบ

4. การจับโปรตีนเป้าหมายกับเม็ดแม่เหล็ก:

ก) ระงับน้ำหนักเปียกของสิ่งมีชีวิต 2 กรัมด้วย Binding Buffer 10 มล. และหลังจากการแตกตัวและการสลาย ตัวอย่างของโปรตีนดิบเป้าหมายจะถูกเติมลงในหลอดหมุนเหวี่ยงที่มีเม็ดแม่เหล็กที่ผ่านการบำบัดแล้ว และวางหลอดไว้ใน เครื่องผสมน้ำวนและเขย่าเป็นเวลา 15 วินาที จากนั้นเติมตัวอย่างโปรตีนดิบเป้าหมายลงในหลอดหมุนเหวี่ยงที่มีเม็ดบีดแม่เหล็กที่ผ่านการบำบัดไว้ล่วงหน้า

b) วางหลอดสำหรับการหมุนเหวี่ยงบนเครื่องผสมแบบหมุนเป็นเวลา 20-30 นาทีที่อุณหภูมิห้อง (หากจำเป็น สามารถหมุนและผสมเป็นเวลา 1 ชั่วโมงที่อุณหภูมิต่ำ 2-8 องศา เพื่อป้องกันการย่อยสลายของโปรตีนเป้าหมาย) .

c) วางหลอดสำหรับการหมุนเหวี่ยงบนเครื่องแยกแม่เหล็กเพื่อแยกสาร ย้ายส่วนเหนือตะกอนไปยังหลอดสำหรับการหมุนเหวี่ยงใหม่สำหรับการทดสอบครั้งต่อไป และถอดท่อสำหรับการหมุนเหวี่ยงออกจากเครื่องแยกแม่เหล็กสำหรับขั้นตอนการล้างครั้งต่อไป

5. การล้างลูกปัดแม่เหล็ก:

a) เติม Wash Buffer 10 มล. ลงในหลอดสำหรับการหมุนเหวี่ยงที่มีเม็ดบีดแม่เหล็ก ค่อยๆ หมุนหลอดหลายๆ ครั้งเพื่อแขวนเม็ดบีดกลับคืน แยกพวกมันออกด้วยแม่เหล็ก และย้ายสารละลายสำหรับล้างไปยังหลอดสำหรับการหมุนเหวี่ยงใหม่สำหรับการสุ่มตัวอย่าง ทำซ้ำขั้นตอนนี้หนึ่งครั้ง

b) เติม Wash Buffer 10 มล. ลงในหลอดสำหรับการปั่นแยกที่มีเม็ดแม่เหล็กเพื่อแขวนเม็ดบีดอีกครั้ง ย้ายสารแขวนลอยของเม็ดบีดไปยังหลอดสำหรับการปั่นแยกแบบใหม่ (เพื่อหลีกเลี่ยงการปนเปื้อนของโปรตีนเป้าหมายด้วยโปรตีนที่ถูกดูดซับแบบไม่จำเพาะบนผนังของหลอดสำหรับการปั่นแยกแบบเดิม ) แยกส่วนด้วยแม่เหล็ก และปิเปตส่วนเหนือตะกอนลงใน Wash Buffer Collection Tube

6. การชะล้างโปรตีนเป้าหมาย

ก) ผู้ใช้สามารถปรับความเข้มข้นของโปรตีนเป้าหมายได้โดยการเปลี่ยนปริมาตรการชะตามความจำเป็น เติมบัฟเฟอร์การชะล้าง 2-10 มิลลิลิตร ค่อยๆ หมุนหลอดหลายๆ ครั้งเพื่อแขวนเม็ดบีด แยกเม็ดบีดด้วยแม่เหล็ก และรวบรวมสารชะลงในหลอดหมุนเหวี่ยงใหม่ ซึ่งเป็นตัวอย่างโปรตีนเป้าหมายที่บริสุทธิ์

ก) หากจำเป็น ให้ทำซ้ำขั้นตอนข้างต้นหนึ่งครั้งเพื่อเก็บตัวอย่างลงในหลอดหมุนเหวี่ยงใหม่เพื่อทดสอบว่าโปรตีนเป้าหมายถูกชะออกจนหมดหรือไม่

b) ตรวจหาโปรตีนเป้าหมายโดย SDS-PAGE หรือ Western blotting หากคุณต้องการวัดความเข้มข้นของโปรตีน คุณสามารถใช้ Elution Buffer เพื่อทำให้ความเข้มข้นเป็นศูนย์ หรือใช้การฟอกไตหรือการกรองแบบอัลตราฟิลเตรชันเพื่อกำจัด Imidazole แล้ววัดความเข้มข้น

7. การประมวลผลหลังลูกปัดแม่เหล็ก

a) เติมบัฟเฟอร์การชะล้าง 5 มล. ลงในหลอดหมุนเหวี่ยงที่มีเม็ดบีดแม่เหล็ก หมุนหลอดขึ้นและลงหลายๆ ครั้งเพื่อแขวนเม็ดบีด แยกพวกมันออกด้วยแม่เหล็กและเอาส่วนที่ลอยเหนือตะกอนออก

b) ทำซ้ำขั้นตอนข้างต้นสองครั้ง

c) เติม ddH O 5 มล. ลงในหลอดหมุนเหวี่ยงที่มีเม็ดบีดแม่เหล็ก หมุนหลอดขึ้นและลงหลายๆ ครั้งเพื่อแขวนเม็ดบีด แยกออกจากกันด้วยสนามแม่เหล็ก และเอาส่วนที่ลอยเหนือตะกอนออก

d) ทำซ้ำขั้นตอนข้างต้นสองครั้ง

จ) เติมสารละลายถนอมอาหารลงในเม็ดแม่เหล็กเพื่อให้ได้ปริมาตรรวม 5 มล. เก็บที่อุณหภูมิ 2-30 องศา (สำหรับการเก็บรักษาระยะยาว วางที่อุณหภูมิ 2-8 องศา ) และสามารถใช้สำหรับ การทำให้โปรตีนชนิดเดียวกันบริสุทธิ์ครั้งต่อไป

8. การฟื้นฟูลูกปัดแม่เหล็ก

เมื่อใช้เม็ดบีดแม่เหล็กอย่างต่อเนื่อง 3 ครั้งขึ้นไป ความสามารถในการจับโปรตีนเป้าหมายอาจลดลงอย่างมาก และแนะนำให้ดำเนินการกระบวนการสร้างเม็ดบีดแม่เหล็กใหม่ ยกตัวอย่างเม็ดบีดแม่เหล็กแขวนลอย 10% (v/v) 5 มล. เพื่อแสดงตัวอย่างการดำเนินการสร้างเม็ดบีดแม่เหล็กใหม่โดยละเอียด

a) สารแขวนลอยเม็ดแม่เหล็กถูกแยกออกด้วยแม่เหล็ก นำส่วนลอยเหนือตะกอนออก และนำหลอดสำหรับการปั่นแยกออกจากตัวแยกแม่เหล็ก เติม ddH2O 5 มล. ลงในหลอดสำหรับการปั่นแยก และหมุนหลอดสำหรับการปั่นแยกขึ้นและลงหลายๆ ครั้งเพื่อแขวนเม็ดบีดแม่เหล็กอีกครั้ง , แยกส่วนด้วยแม่เหล็กและเอาส่วนเหนือตะกอนออก

b) เติมน้ำยาล้างโคบอลต์ 5 มล. หมุนหลอดหมุนเหวี่ยงขึ้นและลงหลาย ๆ ครั้งเพื่อแขวนเม็ดแม่เหล็กกลับคืน หมุนและผสมเป็นเวลา 5 นาทีที่อุณหภูมิห้อง แยกจากกันด้วยสนามแม่เหล็กและเอาส่วนที่ลอยเหนือตะกอนออก ทำซ้ำขั้นตอนนี้หนึ่งครั้ง

c) เติม ddH2O 5 มล. ลงในหลอดหมุนเหวี่ยงที่มีเม็ดบีดแม่เหล็ก หมุนหลอดขึ้นและลงหลายๆ ครั้งเพื่อแขวนเม็ดบีด แยกออกจากกันด้วยสนามแม่เหล็ก และเอาส่วนที่ลอยเหนือตะกอนออก

d) การบำบัดด้วยอัลคาไลน์ (ขั้นตอนเสริม): เติมบัฟเฟอร์ล้างอัลคาไลน์ 5 มล. หมุนหลอดเซนตริฟิวจ์ขึ้นและลงหลายครั้งเพื่อแขวนเม็ดบีดอีกครั้ง หมุนและผสมเป็นเวลา 5 นาทีที่อุณหภูมิห้อง แยกจากกันด้วยแม่เหล็กและเอาส่วนที่ลอยเหนือตะกอนออก เติม ddH2O 5 มล. หมุนหลอดเซนตริฟิวจ์ขึ้นและลงหลาย ๆ ครั้งเพื่อแขวนเม็ดบีดอีกครั้ง จากนั้นแยกส่วนเหนือตะกอนออกด้วยแม่เหล็ก ทำซ้ำขั้นตอนการล้าง ddH2O 3-5 ครั้งจนกว่าน้ำยาซักผ้าจะเป็นกลาง

e) เติมนิกเกิลคลอไรด์ 5 มล. หมุนหลอดเหวี่ยงขึ้นและลงหลาย ๆ ครั้งเพื่อแขวนเม็ดบีดอีกครั้ง หมุนและผสมเป็นเวลา 20 นาทีที่อุณหภูมิห้อง แยกจากกันด้วยสนามแม่เหล็กและเอาส่วนที่ลอยเหนือตะกอนออก

f) เติม ddH2O 5 มล. แล้วหมุนหลอดหมุนเหวี่ยงขึ้นและลงหลาย ๆ ครั้งเพื่อแขวนเม็ดบีดอีกครั้ง จากนั้นแยกส่วนลอยเหนือตะกอนออกด้วยแม่เหล็ก ทำซ้ำขั้นตอนนี้ 4 ครั้ง

g) เติมสารละลายถนอมอาหารลงในเม็ดแม่เหล็กเพื่อให้ได้ปริมาตรรวม 5 มล. และเก็บไว้ที่ 2-30 องศา (สำหรับการเก็บรักษาระยะยาว ให้วางไว้ที่ 2-8 องศา )

 

 

1. ผลิตภัณฑ์นี้เก็บอยู่ในเอธานอล 20% และควรเปลี่ยนก่อนใช้งาน

2. ห้ามแช่แข็งหรือทำให้ลูกปัดแห้ง เนื่องจากอาจส่งผลต่อการใช้งานครั้งสุดท้าย

3. ใช้กับกรอบแม่เหล็กที่เข้ากัน

 

สำหรับใช้ในการวิจัยเท่านั้น ไม่ใช้สำหรับขั้นตอนการวินิจฉัยหรือการรักษา!

 

 

ป้ายกำกับยอดนิยม: swemagrose ida-co แม่เหล็ก agarose ลูกปัดสำหรับ his-tag โปรตีนบริสุทธิ์, จีน swemagrose ida-co แม่เหล็ก agarose ผู้ผลิต, ซัพพลายเออร์, โรงงาน