ชุดสกัด RNA ของพืช

ชุดนี้ใช้คอลัมน์ซิลิกาเจลเพื่อสกัด RNA ที่มีความบริสุทธิ์สูงและความสมบูรณ์สูงได้อย่างสะดวกและรวดเร็วจากตัวอย่างเนื้อเยื่อพืชธรรมดา 50-100 มก. (เช่น ข้าวสาลี ใบข้าวโพด ฯลฯ) ระบบบัฟเฟอร์ของผลิตภัณฑ์นี้สามารถแยกตัวอย่างเนื้อเยื่อพืชได้อย่างมีประสิทธิภาพ และกำจัดสารทุติยภูมิในตัวอย่างได้อย่างมาก RNA ที่สกัดด้วยความบริสุทธิ์สูงสามารถนำมาใช้โดยตรงในการทดลองทางอณูชีววิทยาต่างๆ เช่น Northern hybridization, spot hybridization, mRNA purification, in vitro Translation, RT-PCR, RT-qPCR, cDNA Library Construction เป็นต้น

DNase, DTT Solution ถูกขนส่งในน้ำแข็งเปียกและเก็บไว้ที่ -20 องศา ; รีเอเจนต์ที่เหลือจะถูกขนส่งและเก็บไว้ที่อุณหภูมิห้อง วันหมดอายุคือ 12 เดือน

1. หาก Buffer PRL1 ตกตะกอน โปรดตั้งอุณหภูมิไว้ที่ 37 องศา และใช้เมื่อกลับคืนสู่อุณหภูมิห้อง

2. ก่อนใช้งาน โปรดเติมสารละลาย DTT ลงในบัฟเฟอร์ PRL3 จนกระทั่งความเข้มข้นสุดท้ายคือ 4% กล่าวคือ เติมสารละลาย DTT 40 µL ลงในบัฟเฟอร์ PRL3 1 มล. ไลซีนนี้เตรียมได้ดีที่สุดสดใหม่ โดยเพิ่มบัฟเฟอร์ PRL3 ลงในโซลูชัน DTT สามารถเก็บไว้ที่อุณหภูมิ 4 องศาเป็นเวลาหนึ่งเดือน

3. ก่อนใช้งาน โปรดเติมเอทานอลสัมบูรณ์ 12 มล. ลงในบัฟเฟอร์ RWA และเอทานอลสัมบูรณ์ 80 มล. ลงในบัฟเฟอร์ RWB

4. เมื่อบดด้วยเครื่องบด ให้ทำให้เครื่องบดเย็นล่วงหน้า

1. การสลายเนื้อเยื่อพืช:

ถ่ายโอนเนื้อเยื่อพืชสดหรือแช่แข็งด้วยความเย็น {{0}} มก. ไปยังหลอดบดไร้นิวเคลียสขนาด 2.0 มล. (แนะนำ HT-200-M) ที่มีเม็ดเซอร์โคเนีย 3-4 3 มม. (แนะนำ G{{6 }}G) และระบายความร้อนล่วงหน้าด้วยไนโตรเจนเหลว วางท่อเจียรบนเครื่องบด (แนะนำ KZ-5F-3D) (ทำให้อะแดปเตอร์เย็นลงอย่างรวดเร็วในไนโตรเจนเหลวก่อนวางท่อเจียร ขั้นตอนการเจียรที่แนะนำ: ตั้งค่าความถี่เป็น 60 HZ อุณหภูมิเป็น 4 องศา บดครั้งละ 30 วินาที ทำซ้ำขั้นตอน 4 ครั้ง โดยเว้นระยะห่างระหว่างการบดครั้งละ 5 วินาที) แล้วบดจนเป็นผงสนิท (หากเนื้อเยื่อยังบดเป็นผงไม่หมดก็ให้บดให้ละเอียด) จะส่งผลต่อผลผลิตและคุณภาพของ RNA สามารถยืดเวลาการบดได้จนกว่าเนื้อเยื่อจะกราวด์เต็มที่) เมื่อการเจียรเสร็จสิ้น ให้เติมบัฟเฟอร์ PRL1 500 μL ลงในท่อเจียร ผสมเนื้อหากลับด้านและบ่มที่ 56 องศาเป็นเวลา 15 นาที โดยผสมกลับด้านทุกๆ 5 นาที

2. ปั่นเหวี่ยงที่ 12,000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 5 นาทีที่อุณหภูมิห้อง ถ่ายของเหลวเหนือตะกอนไปยังหลอดสำหรับการหมุนเหวี่ยงขนาด 1.5 มล. หลอดใหม่ เติมบัฟเฟอร์ PRL2 ปริมาตรเหนือตะกอน 1/5 โดยคว่ำลงจนสุดแล้วผสมให้เข้ากัน

3. ปั่นแยกที่ 12,000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 5 นาทีที่ 4 องศา ย้ายส่วนเหนือตะกอนไปยังหลอดสำหรับการหมุนเหวี่ยงขนาด 2.0 มล. ใหม่ เติมบัฟเฟอร์ PRL3 500 μL ลงในส่วนลอยเหนือตะกอน (ตรวจสอบให้แน่ใจว่าคุณได้เพิ่มสารละลาย DTT ก่อนใช้งาน) โดยคว่ำลงจนสุดแล้วผสมให้เข้ากัน

4. เติมเอทานอล 1/2 ปริมาตรลงในส่วนผสมจากขั้นตอนก่อนหน้า คว่ำลงจนสุดแล้วผสมให้เข้ากัน

5. ถ่ายโอนส่วนผสมไปยัง RNA Spin Column การเติมแต่ละครั้งต้องไม่เกิน 600 ไมโครลิตร หากเกินกว่านั้นสามารถเติมเป็นชุดได้

6. ปั่นเหวี่ยงที่ 12,000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 1 นาทีที่อุณหภูมิห้อง แล้วทิ้งสิ่งที่กรองออก ใส่ RNA Spin Column กลับเข้าไปใน Collection Tube

7. เติมบัฟเฟอร์ RWA 500 μL ลงในคอลัมน์หมุน RNA และปั่นแยกที่ 12,000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 1 นาทีที่อุณหภูมิห้อง จากนั้นทิ้งสิ่งกรองออก

8. เพิ่มบัฟเฟอร์ RWB 600 μL ลงในคอลัมน์หมุน RNA (โปรดเพิ่มบัฟเฟอร์ RWB ตามแนวผนังท่อเพื่อช่วยชะล้างเกลือที่ตกค้างบนผนังท่อ) และปั่นแยกที่ 12,000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 1 นาทีที่อุณหภูมิห้อง จากนั้นทิ้งตัวกรอง

9. การย่อย DNase:

a) การเตรียมสารละลายปฏิกิริยา DNase: ผสมบัฟเฟอร์ DNase 5 μL 10 × DNase 5 μL, DNase 5 μL, น้ำที่ปราศจากนิวคลีเอส 40 μL ในหลอดปั่นแยกไร้นิวคลีเอสขนาด 1.5 มล. ใหม่

b) เติมสารละลายปฏิกิริยา DNase 50 ไมโครลิตรที่ศูนย์กลางของ RNA Spin Column และยืนที่อุณหภูมิห้องที่ 15 นาที

c) เพิ่มบัฟเฟอร์ RWB 500 μL ลงในคอลัมน์หมุน RNA และปั่นแยกที่ 12,000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 30 วินาทีที่อุณหภูมิห้อง จากนั้นทิ้งสิ่งกรองออก ใส่คอลัมน์ RNA Spin กลับเข้าไปในหลอดรวบรวม

10. ทำซ้ำขั้นตอนที่ 8

11. ใส่ RNA Spin Column ลงในหลอดรวบรวม ปั่นแยกที่ 12,000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 2 นาทีที่อุณหภูมิห้องเพื่อนำของเหลวที่ตกค้างออก

12. ย้าย RNA Spin Column ไปยังหลอดสำหรับการปั่นแยกแบบไม่มีนิวเคลียสขนาด 1.5 มล. ใหม่ โดยตั้งไว้ที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 3~5 นาที เพื่อให้เอทานอลที่ตกค้างของ RNA Spin Column สามารถระเหยออกไปได้อย่างสมบูรณ์

13. เติมน้ำปลอดนิวคลีเอส 50-100 μL ที่ตรงกลางของคอลัมน์หมุน RNA ยืนที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 5 นาที ปั่นแยกที่ 12,000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 2 นาทีที่อุณหภูมิห้องเพื่อรวบรวม RNA เพื่อให้ได้รับความเข้มข้นของ RNA ที่สูงขึ้น คุณยังสามารถเพิ่มตัวชะแรกกลับไปที่ RNA Spin Column จากนั้นยืนที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 5 นาทีและปั่นแยกที่ 12,000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 2 นาทีที่อุณหภูมิห้องเพื่อรวบรวม RNA อีกครั้ง .

1. โปรดสวมเสื้อกาวน์แล็บและถุงมือแบบใช้แล้วทิ้งเมื่อใช้งาน

2. ใช้ผลิตภัณฑ์และเคล็ดลับพลาสติกที่ปราศจาก RNase เพื่อหลีกเลี่ยงการปนเปื้อนข้าม

3. ใช้แท่นทดสอบพิเศษและอุปกรณ์อิเล็กโทรโฟเรซิสสำหรับการทำงานของ RNA และสวมหน้ากากระหว่างการทำงานเพื่อป้องกันไม่ให้อุปกรณ์และรีเอเจนต์ที่ใช้เป็นมลภาวะ RNase

4. หากมีการเก็บตัวอย่างพืชนอกห้องปฏิบัติการ ควรวางตัวอย่างในไนโตรเจนเหลวเพื่อหลีกเลี่ยงผลกระทบต่อผลผลิตและคุณภาพของ RNA

ผลผลิต RNA ที่สกัดจากตัวอย่างพืชและเชื้อราหลายชนิดโดยชุดอุปกรณ์นี้แสดงอยู่ในตารางด้านล่าง ผลผลิต RNA เกี่ยวข้องกับพันธุ์พืช อวัยวะ ความสด และสถานะการเจริญเติบโต ตารางต่อไปนี้ใช้สำหรับการอ้างอิงเท่านั้น

สำหรับใช้ในการวิจัยเท่านั้น!

ป้ายกำกับยอดนิยม: ชุดสกัด rna ของพืช ผู้ผลิตชุดสกัด rna ของพืชจีน ซัพพลายเออร์ โรงงาน