ชุด DNA จีโนมของพืชสำหรับโพลีแซ็กคาไรด์และโพลีฟีนอล

 

ชื่อสินค้า	แมว.No.	ข้อมูลจำเพาะ
ชุด DNA จีโนมของพืชสำหรับโพลีแซ็กคาไรด์และโพลีฟีนอล	G3643-50T	50 T

 

 

ชุดนี้ได้รับการออกแบบมาเป็นพิเศษเพื่อการสกัด DNA จีโนมที่มีความบริสุทธิ์สูงอย่างปลอดภัย รวดเร็ว และมีประสิทธิภาพจากตัวอย่างเชื้อราและเนื้อเยื่อพืชที่ซับซ้อนต่างๆ ที่อุดมไปด้วยโพลีแซ็กคาไรด์ โพลีฟีนอล ระบบบัฟเฟอร์สลายได้รับการปรับปรุงอย่างระมัดระวัง ไม่เพียงแต่บดและแยกตัวอย่างเนื้อเยื่อพืชโดยตรง แต่ยังกำจัดสิ่งเจือปน เช่น โพลีแซ็กคาไรด์ โพลีฟีนอล และโปรตีนได้อย่างมีประสิทธิภาพ กระบวนการทั้งหมดสามารถเสร็จสิ้นได้ภายใน 1 ชั่วโมง และดีเอ็นเอจีโนมที่มีความบริสุทธิ์สูงที่สกัดได้สามารถนำมาใช้สำหรับการทดลองทางอณูชีววิทยาต่างๆ รวมถึง PCR, ปฏิกิริยาการย่อยของเอนไซม์, การผสมพันธุ์ทางตอนใต้, RAPD, AFLP, RFLP และอื่นๆ

 

 

RNase A ถูกจัดส่งพร้อมกับน้ำแข็งเปียกและเก็บไว้ที่ -20 องศา ; รีเอเจนต์อื่นๆ จะถูกขนส่งและเก็บไว้ที่อุณหภูมิห้อง มีอายุ 12 เดือน

 

 

หมายเลขส่วนประกอบ	ส่วนประกอบ	G3643-50T
G3643-1	บัฟเฟอร์ PGLA	40 มล
G3643-2	บัฟเฟอร์ PGLB	8 มล
G3643-3	บัฟเฟอร์ GB	12 มล
G3643-4	บัฟเฟอร์ GD	12 มล
G3643-5	บัฟเฟอร์ PW	24 มล
G3643-6	อาร์เนส เอ	500 μL
G3643-7	คอลัมน์ DNA Spin	50
G3643-8	หลอดสะสม	50
G3643-9	บัฟเฟอร์ TE	10 มล
คู่มือ		หนึ่งสำเนา

 

 

1. ตัวอย่างพืชที่เก็บรักษาด้วยการแช่แข็งควรหลีกเลี่ยงการแช่แข็งและละลายซ้ำๆ มิฉะนั้น คุณภาพและผลผลิตของ DNA ที่สกัดได้จะลดลง

2. หาก Buffer PGLA ตกตะกอน โปรดตั้งอุณหภูมิไว้ที่ 65 องศา และนำไปใช้เมื่อกลับคืนสู่อุณหภูมิห้อง

3. ก่อนใช้งาน โปรดเติมไอโซโพรพานอล 28 มล. ลงในบัฟเฟอร์ GB และผสมให้เข้ากัน

4. ก่อนใช้งาน โปรดเติมเอธานอลสัมบูรณ์ 18 มล. ลงในบัฟเฟอร์ GD และเอทานอลปราศจากน้ำ 56 มล. ลงในบัฟเฟอร์ PW

5. จำนวนตัวอย่างเนื้อเยื่อพืชเริ่มต้นมีอิทธิพลอย่างมากต่อผลการสกัดของ gDNA หากปริมาณเริ่มต้นมากเกินไป คุณภาพการสกัดและผลผลิตสัมพัทธ์ของ gDNA จะลดลง ก่อนเริ่มการทดลอง โปรดดูตารางที่ 1 ต่อไปนี้สำหรับการใช้บัฟเฟอร์ PGLA และบัฟเฟอร์ PGLB ที่สอดคล้องกับจำนวนตัวอย่างเนื้อเยื่อพืชเริ่มต้นที่แตกต่างกัน

 

ตารางที่ 1 การใช้บัฟเฟอร์ PGLA และบัฟเฟอร์ PGLB สอดคล้องกับปริมาณตัวอย่างเนื้อเยื่อพืชเริ่มต้นที่แตกต่างกัน

การใช้ตัวอย่างเนื้อเยื่อพืช	การใช้บัฟเฟอร์ PGLA	การใช้บัฟเฟอร์ PGLB
น้อยกว่าหรือเท่ากับ 50 มก	500 μL	100 μL
50~200 มก	750 μL	150 μL

 

 

1. การสลายเนื้อเยื่อพืช:

ก. (แนะนำ) เติมบัฟเฟอร์ PGLA ในปริมาณที่เหมาะสม (การใช้งานที่แนะนำในตารางที่ 1) ลงในท่อบดไร้นิวเคลียสขนาด 2.0 มล. (แนะนำ HT-200-M) ล่วงหน้า จากนั้นจึงเติม 3~{ เม็ดสแตนเลส {6}} มม. (แนะนำ G0104-200G) จากนั้น ถ่ายโอนเนื้อเยื่อพืชสดหรือแช่แข็งด้วยการแช่แข็งขนาด 50~100 มก. ไปยังท่อบดอย่างรวดเร็ว วางท่อบดบนเครื่องบด (แนะนำ KZ-5F-3D) และทำตามขั้นตอนการบดที่แนะนำ: ตั้งค่าความถี่เป็น 70 HZ บดเป็นเวลา 30 วินาทีในแต่ละครั้ง ทำซ้ำขั้นตอน 15~20 ครั้งโดยมีช่วงเวลา 5 วินาทีระหว่างการบดแต่ละครั้ง หากบดตัวอย่างได้ยาก เช่น เมล็ดพืช คุณสามารถเพิ่มเวลาในการบดเป็น 30 หรือมากกว่านั้นได้ หากเนื้อเยื่อไม่ทำให้เป็นเนื้อเดียวกันอย่างทั่วถึง จะส่งผลต่อผลผลิตและคุณภาพของ DNA เมื่อการบดเสร็จสมบูรณ์ ให้เติม RNase A 10 μL ลงในท่อบด ผสมสิ่งที่อยู่ภายในกลับด้านและบ่มที่ 65 องศาเป็นเวลา 15 นาที โดยผสมกลับด้านทุกๆ 5 นาที

ข. ถ่ายโอนเนื้อเยื่อพืชสดหรือเก็บรักษาด้วยการแช่แข็งอย่างรวดเร็วไปยังหลอดบดไร้นิวเคลียร์ขนาด 2.0 มล. (แนะนำ HT-200-M) ที่ประกอบด้วยเม็ดเซอร์โคเนียขนาด 3~4 3 มม. (แนะนำ G{{6} }G) และระบายความร้อนล่วงหน้าด้วยไนโตรเจนเหลว วางท่อบดบนเครื่องบด (แนะนำ KZ-5F-3D) (ทำให้อะแดปเตอร์เย็นลงอย่างรวดเร็วในไนโตรเจนเหลวก่อนที่จะวางท่อบด) และบดจนเป็นผงอย่างสมบูรณ์ (หากเนื้อเยื่อไม่เป็นผง) บดจนเป็นผงจะส่งผลต่อผลผลิตและคุณภาพของ DNA) จากนั้นเติม Buffer PGLA ในปริมาณที่เหมาะสม (แนะนำการใช้งานในตารางที่ 1) แล้วนำไปใส่เครื่องบดอีกครั้งเป็นเวลา 1 นาที เมื่อการบดเสร็จสมบูรณ์ ให้เติม RNase A 10 μL ลงในท่อบด ผสมสิ่งที่อยู่ภายในกลับด้านและบ่มที่ 65 องศาเป็นเวลา 15 นาที โดยผสมกลับด้านทุกๆ 5 นาที

2. เติมบัฟเฟอร์ PGLB ในปริมาณที่เหมาะสม (ปริมาณที่แนะนำในตารางที่ 1) ลงในหลอดสำหรับการหมุนเหวี่ยง หมุนกลับอย่างรวดเร็วและผสมให้เข้ากัน แล้ววางบนน้ำแข็งเป็นเวลา 5 นาที

3. ปั่นแยกที่ 12,000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 5 นาทีที่ 4 องศา ย้ายส่วนเหนือตะกอนไปยังหลอดสำหรับการหมุนเหวี่ยงขนาด 1.5 มล. หลอดใหม่ (หากยังมีสสารลอยอยู่ในส่วนลอยเหนือตะกอนที่ได้รับ จำเป็นต้องปั่นเหวี่ยงที่ 12,{ {8}} รอบต่อนาทีเป็นเวลา 2 นาทีที่ 4 องศาอีกครั้ง และถ่ายโอนส่วนเหนือตะกอนไปยังหลอดสำหรับการหมุนเหวี่ยงขนาด 1.5 มล. ใหม่หลอดอื่น)

4. เพิ่มบัฟเฟอร์ GB ที่มีปริมาตรเท่ากันกับส่วนลอยเหนือตะกอนลงในหลอดสำหรับการหมุนเหวี่ยง และผสมกลับด้าน

5. วาง DNA Spin Column บน Collection Tube และโอนส่วนผสมไปยัง DNA Spin Column การเติมแต่ละครั้งต้องไม่เกิน 600 ไมโครลิตร หากเกินกว่านั้นสามารถเติมเป็นชุดได้

6. ปั่นเหวี่ยงที่ 12,000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 1 นาทีที่อุณหภูมิห้อง แล้วทิ้งสิ่งที่กรองออก ใส่ DNA Spin Column กลับเข้าไปใน Collection Tube

7. เติมบัฟเฟอร์ GD 500 μL ลงในคอลัมน์ DNA Spin และปั่นแยกที่ 12,000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 1 นาทีที่อุณหภูมิห้อง จากนั้นทิ้งสิ่งกรองออก

8. เติม Buffer PW 600 μL ลงในคอลัมน์ DNA Spin (โปรดเพิ่ม Buffer PW ตามแนวผนังท่อเพื่อช่วยชะล้างเกลือที่ตกค้างบนผนังท่อ) และปั่นแยกที่ 12,000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 1 นาทีที่อุณหภูมิห้อง จากนั้นทิ้งตัวกรอง

9. ทำซ้ำขั้นตอนที่ 8

10. ใส่ DNA Spin Column ลงในหลอดรวบรวม ปั่นแยกที่ 12,000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 2 นาทีที่อุณหภูมิห้องเพื่อเอาของเหลวที่ตกค้างออก

11. ย้าย Spin Column ไปยังหลอดสำหรับการหมุนเหวี่ยงขนาด 1.5 มล. ปลอดนิวเคลียส โดยตั้งไว้ที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 3~5 นาที เพื่อให้เอทานอลที่ตกค้างของ Spin Column สามารถระเหยออกไปได้อย่างสมบูรณ์

12. เติมบัฟเฟอร์ TE หรือน้ำปลอดนิวคลีเอส 50~100 µL ลงในหลอดหมุนเหวี่ยง ยืนที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 5 นาที (การให้ความร้อนบัฟเฟอร์ TE หรือน้ำปลอดนิวคลีเอสที่อุณหภูมิ 65 องศาจะเป็นประโยชน์ในการปรับปรุงประสิทธิภาพการชะล้าง)

13. ปั่นแยกที่ 12,000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 2 นาทีที่อุณหภูมิห้องเพื่อเก็บ DNA เพื่อให้ DNA มีความเข้มข้นสูงขึ้น คุณยังสามารถเพิ่มตัวชะแรกกลับไปที่ DNA Spin Column จากนั้นยืนที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 5 นาที และปั่นแยกเป็นเวลา 2 นาทีที่อุณหภูมิห้องเพื่อเก็บ DNA อีกครั้ง

 

 

1. พยายามใช้เนื้อเยื่อพืชสดเพื่อให้แน่ใจว่าได้ผลผลิตและความสมบูรณ์ของ DNA ของจีโนม

2. เพื่อการเก็บรักษาในระยะยาว DNA ที่สกัดได้ควรชะล้างด้วย Buffer TE และเก็บไว้ที่อุณหภูมิ -80 องศา

3. DNA จีโนมที่ได้รับควรหลีกเลี่ยงการแช่แข็งและละลายซ้ำ

4. หากบัฟเฟอร์สลายตัวมีความหนืดมาก แนะนำให้ลดขนาดตัวอย่างเริ่มต้นหรือเพิ่มปริมาณบัฟเฟอร์สลายตัว

5. สำหรับตัวอย่างที่มีปริมาณน้ำมากขึ้น สามารถเพิ่มขนาดตัวอย่างเริ่มต้นได้อย่างเหมาะสม

กำหนดการ

ปริมาณดีเอ็นเอจีโนมที่สกัดได้จากตัวอย่างพืชและเชื้อราหลายชนิดโดยชุดอุปกรณ์นี้แสดงไว้ในตารางด้านล่าง ผลผลิต DNA ของจีโนมสัมพันธ์กับพันธุ์พืช อวัยวะ และสถานะการเจริญเติบโต ปริมาณที่แนะนำของตัวอย่างแสดงอยู่ในตารางด้านล่าง

 

ตัวอย่าง	ปริมาณ	ผลผลิตดีเอ็นเอ
ใบแปะก๊วย biloba	100 มก	5~10 ส.ค
ใบ Gossypium hirsutum	50 มก	5~10 ส.ค
ใบ Arachis hypogaea	50 มก	5~10 ส.ค
ใบมะเขือม่วง	70 มก	5~10 ส.ค
เมล็ด Gossypium hirsutum	100 มก	10~30 ส.ค
เมล็ด Arachis hypogaea	100 มก	3~5 ส.ค
มะเขือยาว tuberosum	100 มก	0.3~3 ส.ค
เมล็ด Triticum aestivum	100 มก	10~30 ส.ค
เมล็ดคาร์ทามัส ทิงทอเรียส	100 มก	5~10 ส.ค
ใบ Philodendron bipinnatifidum Schott	100 มก	5~10 ส.ค
ใบปินัส	100 มก	10~15 ส.ค
ใบ Cupressus funebris	100 มก	15~30 ส.ค
ใบไบรโอฟิลลัม พินนาทัม	100 มก	0.5~2 ส.ค
Pleurotus ostreatus	100 มก	0.5~1.5 ส.ค
ใบว่านหางจระเข้	200 มก	0.5~2 ส.ค
ผลไม้มะเขือม่วง	300 มก	0.5~1.5 ส.ค

 

สำหรับใช้ในการวิจัยเท่านั้น!

 

 

ป้ายกำกับยอดนิยม: ชุดดีเอ็นเอจีโนมของพืชสำหรับโพลีแซ็กคาไรด์และโพลีฟีนอล ประเทศจีน ชุดดีเอ็นเอจีโนมของพืชสำหรับโพลีแซ็กคาไรด์และโพลีฟีนอล ผู้ผลิต ซัพพลายเออร์ โรงงาน