แนะนำผลิตภัณฑ์

ชื่อสินค้า	แมว. เลขที่	ข้อมูลจำเพาะ
2 x Fast Pfus PCR มาสเตอร์มิกซ์	G3305-01	1 มล
2 x Fast Pfus PCR มาสเตอร์มิกซ์	G3305-05	5×1 มล

รายละเอียดสินค้า/บทนำ

Fast Pfus PCR Master Mix นี้เป็นพรีมิกซ์ PCR พร้อมใช้งานซึ่งประกอบด้วย Pfu DNA polymerase, dNTP ที่ดัดแปลง และบัฟเฟอร์ปฏิกิริยา PCR ที่ปรับให้เหมาะสมที่ความเข้มข้น 2× สำหรับ PCR ประจำ, PCR โคโลนี, PCR พร้อมเทมเพลตที่ซับซ้อนและเทมเพลต GC สูง การขยาย PCR สามารถทำได้โดยการเพิ่มเทมเพลต ไพรเมอร์ และ ddH2O เท่านั้น เพื่อให้ความเข้มข้นของสารละลายผสมเท่ากับ 1× ความสามารถในการขยายสัญญาณที่แข็งแกร่ง, ความเร็วการขยายที่รวดเร็ว, ความเร็วการขยายสูงสุด 5-15 s/kb, ความเที่ยงตรงสูง, ความจำเพาะสูง, ผลิตภัณฑ์ขยายสัญญาณเป็นแบบปลายแบน มีการเพิ่ม Loading Dye ลงในผลิตภัณฑ์แล้ว และผลิตภัณฑ์ที่ขยายขนาดสามารถนำมาใช้โดยตรงสำหรับการตรวจจับอิเล็กโตรโฟรีซิสของเจลอะกาโรส

เงื่อนไขการจัดเก็บและการจัดส่ง

จัดส่งด้วยน้ำแข็งเปียก เก็บที่อุณหภูมิ -20 องศา มีอายุ 12 เดือน หลีกเลี่ยงการแช่แข็งละลายซ้ำๆ

เนื้อหาผลิตภัณฑ์

ส่วนประกอบ	G3305-01	G3305-05
2 x Fast Pfus PCR มาสเตอร์มิกซ์	1 มล	5×1 มล
คู่มือ	หนึ่งสำเนา

ระเบียบวิธี/ขั้นตอนการทดสอบ

1. แนะนำระบบปฏิกิริยา PCR

ส่วนประกอบ	20 ไมโครลิตร rxn	50 ไมโครลิตร rxn	ความเข้มข้นสุดท้าย
เทมเพลต	ตัวแปร	ตัวแปร	ตามความจำเป็น
ฟอร์เวิร์ดไพรเมอร์ (10 μM)b	0.8 μL	2 μL	0.4 μM
รีเวิร์สไพรเมอร์ (10 μM)b	0.8 μL	2 μL	0.4 μM
2×Fast Pfus PCR มาสเตอร์มิกซ์	10 μL	25 μL	1×
(DMSO ไม่จำเป็น)	(0.6 μL)	(1.5 μL)	(3%)
ddH2O	เพิ่มเป็น 20 ไมโครลิตร	เพิ่มเป็น 50 ไมโครลิตร

ตอบ: จำนวนเทมเพลตที่สูงขึ้นจะเพิ่มความเสี่ยงในการสร้างผลิตภัณฑ์ PCR ที่ไม่เฉพาะเจาะจง จำนวนเทมเพลตที่น้อยลงจะลดความแม่นยำของการขยายสัญญาณ หากเทมเพลตเป็นพลาสมิดหรือจากแบคเทอริโอฟาจ แนะนำให้เติม 50ng-5pg ใน 50 μL rnx หาก Tempalted เป็น DNA ของจีโนม แนะนำให้เติม 250ng-50ng ใน 50 μL rnx หากเทมเพลตคือ cDNA ให้เจือจาง cDNA ดั้งเดิมของคุณลง 2-100 เท่า และปริมาตรของ cDNA เจือจางที่เติมลงในปฏิกิริยาจะไม่เกิน 10% ของปริมาตรปฏิกิริยาทั้งหมด หากเทมเพลทคือของเหลวจากแบคทีเรียหรือตัวอย่างสารสกัดหยาบ ปริมาตรที่เติมลงในปฏิกิริยาจะไม่เกิน 10% ของปริมาตรปฏิกิริยาทั้งหมด เทมเพลตในปริมาณที่มากขึ้นมีแนวโน้มที่จะนำไปสู่การขยายสัญญาณที่ไม่เฉพาะเจาะจง จำนวนเทมเพลตที่น้อยลงมีแนวโน้มที่จะทำให้ประสิทธิภาพการขยาย PCR ต่ำ

b: ช่วงความเข้มข้นของไพรเมอร์สุดท้ายที่ใช้คือ {{0}}.2-1.0 μM และแนะนำให้ใช้ 0.4 μM ไพรเมอร์ที่น้อยเกินไปอาจส่งผลให้ผลผลิตของการขยายต่ำหรือไม่มีเลย และไพรเมอร์ที่มากเกินไปอาจส่งผลให้เกิดการขยายที่ไม่เฉพาะเจาะจง

c: สำหรับเทมเพลตเนื้อหา GC สูง DMSO ที่มีปริมาณรวมไม่เกิน 10%

2. เงื่อนไขการขยาย PCR ที่แนะนำ

ขั้นตอน	อุณหภูมิ	เวลา	จำนวนรอบ
การสูญเสียสภาพธรรมชาติเบื้องต้น	98 องศา	30 s-120 s	1
การเสียสภาพ	98 องศา	5-10 s	25-35
การหลอมข	50-72 องศา	10-30 s
ส่วนขยายค	72 องศา	5-15 วินาที/กิโลไบต์
ส่วนขยายสุดท้าย	72 องศา	5-10 นาที	1
ถือ	4-16 องศา	ตลอดไป

a: เวลาก่อนการเสียสภาพ 30 วินาทีเหมาะสำหรับเทมเพลตทั่วไปส่วนใหญ่ เทมเพลตที่ซับซ้อนสามารถถูกแปลงสภาพได้นานถึง 2 นาที

b: สำหรับการขยายเทมเพลตที่ซับซ้อนซึ่งมีไพรเมอร์ที่ต่อกัน สามารถขยายเวลาการหลอมได้สูงสุด 30 วินาที

c: ขั้นตอนการขยายที่แนะนำคือ 5-10 s/kb ที่ 72 องศาสำหรับเทมเพลตอย่างง่าย เช่น พลาสมิด ,10-15 s/kb สำหรับเทมเพลต DNA จีโนมประจำ, 15-30 s/kb สำหรับเทมเพลตที่ซับซ้อน .