IF488-แอกกลูตินินจมูกข้าวสาลี (WGA, ไฟเขียว)

 

ชื่อสินค้า	แมว. เลขที่.	ข้อมูลจำเพาะ
iF488-แอกกลูตินินจมูกข้าวสาลี(WGA,ไฟเขียว)	G1730	100UL

 

 

จมูกข้าวสาลี agglutinin (WGA) เป็นเลคตินที่จับกับ N-acetyl-D-glucosamine และกรดเซียลิก และเป็นหนึ่งในเลคตินประเภทหนึ่งที่มีการศึกษาและใช้กันอย่างแพร่หลายมากที่สุด ปัจจุบันเป็นเลคตินประเภทที่มีการศึกษาและใช้กันอย่างแพร่หลายมากที่สุด WGA จับกับไกลโคคอนจูเกต และอนุพันธ์และคอนจูเกตของมันถูกนำไปใช้อย่างกว้างขวางในการติดฉลากเยื่อหุ้มเซลล์และเนื้อเยื่อแผลเป็นจากไฟโบรติกสำหรับการถ่ายภาพและการวิเคราะห์เรืองแสง ความจำเพาะในการจับกับคาร์โบไฮเดรตของ WGA มุ่งตรงไปที่ลำดับของ -1,4-เรซิดิวที่เชื่อมโยงกับ GlcNAc หรือที่เรียกว่าไคตินเดกซ์ทริน มอนอแซ็กคาไรด์แต่ละชนิดมีตำแหน่งการจับที่เหมือนกันและไม่โต้ตอบกันสองตำแหน่งซึ่งประกอบกันกับหน่วย -1,4-GlcNAc สามหรือสี่หน่วย จากโมโนแซ็กคาไรด์ที่ทดสอบ มีเพียง GlcNAc เท่านั้นที่จับกับ WGA, ManNAc ไม่จับ และ GalNAc จับได้เพียงเล็กน้อยเท่านั้น WGA จับด้วยสัมพรรคภาพสูงกับสารตกค้าง GlcNAc ภายในในโอลิโกแซ็กคาไรด์ขนาดใหญ่ที่มี Gal (1-4)GlcNAc (1-3) (เช่น ไกลแคนชนิดโพลี (อะมิโนแลคโตส)) เกิดขึ้นซ้ำ กรด N-acetylneuraminic มีส่วนร่วมใน ปฏิสัมพันธ์ที่มีความสัมพันธ์ต่ำของ WGA เท่านั้น WGA แสดงรูปแบบที่ซับซ้อนของความจำเพาะของไกลแคนที่สามารถใช้ในการวิเคราะห์โครงสร้างของคาร์โบไฮเดรตเชิงซ้อนได้ iFluor®488 affix ของ WGA น่าจะเป็น WGA affix ที่สว่างที่สุด โดยแสดงการเรืองแสงสีเขียวที่สดใสของสีย้อม iFluor®488 สารติด WGA iFluor®488 จับกับกรดเซียลิกและเรซิดิว N-อะซิติลกลูโคซามินิล เช่นเดียวกับข้อต่อ AF488 WGA

จมูกข้าวสาลี แอกกลูตินิน (WGA) เป็นเลคตินขนาด 36 kDa ที่ใช้กันทั่วไปในการติดฉลากเซลล์ของสัตว์เลี้ยงลูกด้วยนม เยื่อหุ้มเซลล์ของแบคทีเรียแกรมบวกและยีสต์ ตลอดจนเยื่อหุ้มเซลล์ศักดิ์สิทธิ์ของโครงกระดูกและหัวใจ และอื่นๆ อีกมากมาย เนื่องจากคุณสมบัติของมันในการเชื่อมต่อกับ N-acetyl - -D-กลูโคซามินิลเรซิดิวและ N-อะซิติล- -D-กลูโคซามินิล โอลิโกเมอร์ในเยื่อหุ้มเซลล์ เมื่อใช้ WGA สำหรับการย้อมสีคาร์ดิโอไมโอไซต์ เยื่อหุ้มเซลล์ของคาร์ดิโอไมโอไซต์สามารถถูกย้อมสีได้ ดังนั้นไม่ว่าจะมองเห็นมากเกินไปหรือไม่ก็ตามจากการเปรียบเทียบภาพกับกลุ่มปกติ และเส้นผ่านศูนย์กลางและพื้นที่ของเซลล์ที่ย้อมสีก็สามารถทำได้เช่นกัน วัดด้วยซอฟต์แวร์พิเศษ ช่วยให้วิเคราะห์ได้ว่าคาร์ดิโอไมโอไซต์มีภาวะเจริญเกินหรือไม่

 

 

จัดส่งด้วยน้ำแข็งเปียก เก็บที่อุณหภูมิ -20 องศาเป็นเวลา 12 เดือน

 

 

ส่วนประกอบ	G1722-50ยูแอล
iF488-แอกกลูตินินจมูกข้าวสาลี(WGA,ไฟเขียว)	100 μL
คู่มือ	1 ชิ้น

 

 

1. เตรียมของคุณเองบัฟเฟอร์ 1×PBS(pH 7.2-7.4 แนะนำG4202) สารตรึงที่มีฟอร์มาลดีไฮด์ 3.0-4.0% (แนะนำG1101 ซึ่งมี PFA 4%),เครื่องซีลดับสารป้องกันการเรืองแสง(ที่แนะนำ G1401), และโซลูชันการย้อมสี DAPI ที่พร้อมใช้งาน(ที่แนะนำG1012).

2. เมื่อใช้ผลิตภัณฑ์เป็นครั้งแรก ให้ปั่นแยกผลิตภัณฑ์ที่ละลายจนหมดด้วยความเร็วต่ำเป็นเวลา 1 นาที เพื่อป้องกันการสูญเสียผนังท่อของเหลว ขอแนะนำให้จ่ายผลิตภัณฑ์ตามปริมาณที่ใช้ในการทดลองครั้งเดียวเพื่อป้องกันการสูญเสียตัวทำละลายจากการระเหย เก็บที่อุณหภูมิ -20 องศาให้ห่างจากแสง

3. ก่อนการทดลองอย่างเป็นทางการ ให้ดูดแอกกลูตินินจมูกข้าวสาลี 5 μL 488- (WGA, GreenLight) และผสมกับ PBS 1 มล. เพื่อให้ได้iF488-โซลูชันการทำงานของ WGA- ผลการย้อมสีอาจแตกต่างกันไปตามเซลล์ประเภทต่างๆ โปรดดูเอกสารประกอบเกี่ยวกับความเข้มข้นในการย้อมสีที่เหมาะสมที่สุด หรือทำการทดสอบล่วงหน้าเพื่อหาคำตอบiF488-โซลูชันการทำงานของ WGAพร้อมใช้งาน เก็บที่อุณหภูมิห้อง ป้องกันไม่ให้ถูกแสง และใช้งานภายในวันเดียวกัน

 

 

การย้อมสีเซลล์ที่มีชีวิต (12-ตัวอย่างจานอย่างดี)

1. ล้างเซลล์ด้วยบัฟเฟอร์ 1×PBS 2 ครั้ง

2. เติมสารละลายทำงาน iF488-WGA 100 μL ลงในแต่ละหลุมของเซลล์และบ่มเป็นเวลา 10-30 นาทีที่ 37 องศา โดยป้องกันไม่ให้ถูกแสง ดูแลการปิดผนึกเพื่อป้องกันการระเหยของของเหลว นำสารละลายบ่มออกและล้างด้วยสารละลายบัฟเฟอร์ 2-3 ครั้ง เป็นเวลา 3-5 นาทีในแต่ละครั้ง

3. หลังจากการฟักเสร็จสมบูรณ์ เซลล์จะถูกล้างสามครั้งด้วยบัฟเฟอร์บัฟเฟอร์ 1× PBS เป็นเวลา 5 นาทีในแต่ละครั้ง

4. สังเกตผลลัพธ์ด้วยกล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนซ์หรือกล้องจุลทรรศน์คอนโฟคอลแบบเลเซอร์

 

การย้อมสีเซลล์แบบตายตัว (6-ตัวอย่างโปรแกรมรวบรวมข้อมูลเซลล์เพลต)

1. เซลล์เพาะเลี้ยงถูกคลาน (ที่ความหนาแน่นของการบรรจบกันอย่างน้อย 50%) อาหารเลี้ยงเชื้อจะถูกเอาออก และเซลล์ถูกล้างสองครั้งด้วยบัฟเฟอร์ 1× PBS อุ่นไว้ล่วงหน้าที่ 37 องศา

2. เติมสารตรึงตราในปริมาณที่เหมาะสมเพื่อปกปิดเซลล์และตรึงไว้เป็นเวลา 10-30 นาทีที่อุณหภูมิห้อง

3. สารตรึงถูกดูดออกและล้างเซลล์ด้วยบัฟเฟอร์ 1× PBS ที่อุณหภูมิห้อง 2-3 ครั้งเป็นเวลา 10 นาทีต่อเซลล์

4. หลังจากที่ตัวรวบรวมข้อมูลเซลล์ถูกเขย่าให้แห้งเล็กน้อย ให้วาดวงกลมด้วยปากกาฮิสโตเคมี เพื่อให้เซลล์ต่างๆ อยู่ตรงกลางวงกลม นำสารละลายทำงาน iF488-WGA 100 μL มาคลุมเซลล์ให้ทั่วและฟักที่อุณหภูมิ 37 องศา ห่างจากแสงเป็นเวลา 30 นาที ระวังในการปิดผนึกและป้องกันไม่ให้ของเหลวระเหยเพื่อทำให้สไลด์แห้ง

5. หลังจากการฟักตัวเสร็จสิ้น เซลล์จะถูกล้างสามครั้งด้วยบัฟเฟอร์ 1× PBS เป็นเวลา 5 นาทีในแต่ละครั้ง

6. (ทางเลือก) หยดสารละลายการย้อมสี DAPI ที่พร้อมใช้งานลงในสไลด์ของซอฟต์แวร์รวบรวมข้อมูลเพื่อปกปิดเซลล์ และดำเนินการย้อมสีด้วยนิวเคลียร์เป็นเวลา 8 นาที เซลล์ถูกล้างด้วยบัฟเฟอร์ 1× PBS 2-3 ครั้ง เป็นเวลา 30 วินาที-1 นาทีในแต่ละครั้ง

7. การรวบรวมข้อมูลของเซลล์ถูกเขย่าให้แห้งเล็กน้อยและกลับด้านบนสไลด์โดยมีหยดยาปิดผนึกป้องกันการเรืองแสง และเครื่องปิดผนึกส่วนเกินถูกซับออกด้วยผ้ากระดาษ

[บันทึก]ขั้นตอนที่ 6 และ 7 สามารถแทนที่ได้ด้วยเครื่องปิดผนึกป้องกันการเรืองแสงที่ประกอบด้วย DAPI (คำแนะนำ G1407) ซึ่งสามารถทำการย้อมสีนิวเคลียสและการปิดผนึกฟิล์มได้สำเร็จในเวลาเดียวกัน

8. ผลลัพธ์ถูกสังเกตด้วยกล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนซ์หรือกล้องจุลทรรศน์คอนโฟคอลแบบเลเซอร์โดยเลือกช่องสัญญาณ 488 (Ex/Em=493/517 nm) และ DAPI (Ex/Em=364/454 nm)

 

การย้อมสีส่วนเนื้อเยื่อ

1. การเตรียมการแบ่งส่วนเนื้อเยื่อ:

ส่วนที่แช่แข็ง (ส่วนที่แช่แข็งของเนื้อเยื่อสดหรือส่วนที่แช่แข็งของเนื้อเยื่อคงที่) ถูกปล่อยให้ยืนที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลาหลายนาทีและกลับสู่อุณหภูมิห้อง ส่วนต่างๆ จมอยู่ในสารตรึงเป็นเวลา 10-15 นาทีที่อุณหภูมิห้อง นำออกและทำให้แห้งตามธรรมชาติ จากนั้นชุบและล้างในน้ำบริสุทธิ์หรือบัฟเฟอร์ 1×PBS เพื่อกำจัดสารตรึงที่ตกค้างบนเนื้อเยื่อ

ส่วนพาราฟินถูก dewax และคืนน้ำ;

ส่วนของเนื้อเยื่อ (ส่วนของพาราฟินหรือส่วนที่แช่แข็งของเนื้อเยื่อที่อยู่กับที่) ถูกวางไว้ในคาสเซ็ตการซ่อมแซมที่เต็มไปด้วยบัฟเฟอร์การซ่อมแซมแอนติเจน EDTA (pH 8.0) ในเตาอบไมโครเวฟสำหรับการซ่อมแซมแอนติเจน ใช้ไฟปานกลาง 8 นาที หยุดไฟ 8 นาที ไปจนถึงไฟปานกลาง-ต่ำ 7 นาที กระบวนการนี้ควรป้องกันการระเหยของบัฟเฟอร์มากเกินไป อย่าทำให้สไลด์แห้ง หลังจากการทำความเย็นตามธรรมชาติ สไลด์ถูกใส่ในบัฟเฟอร์ 1×PBS และล้างโดยการเขย่าบนเชคเกอร์ลดสีเป็นเวลา 3 ครั้ง แต่ละครั้งเป็นเวลา 5 นาที

2. การย้อมสี: วาดวงกลมรอบๆ เนื้อเยื่อด้วยปากกาฮิสโตเคมี หลังจากที่ส่วนเนื้อเยื่อแห้งเล็กน้อย เติมสารละลายทำงาน iF488-WGA 50-100 μL ลงในวงกลมเพื่อปกปิดเนื้อเยื่อ และฟักที่อุณหภูมิ 37 องศาจากแสงเป็นเวลา 30 นาที ดูแลการซีลเพื่อป้องกันไม่ให้ของเหลวระเหยและทำให้สไลด์แห้ง

3. ล้าง: หลังจากการฟักตัวเสร็จสิ้น ตัวอย่างจะถูกล้างสามครั้งด้วยบัฟเฟอร์ 1× PBS เป็นเวลา 5 นาทีในแต่ละครั้ง

4. การย้อมสีนิวเคลียส (ไม่จำเป็น): หยดสารละลายการย้อมสี DAPI ที่พร้อมใช้งานลงในตัวอย่างเพื่อปกปิดเซลล์ และทำการย้อมสีนิวเคลียสเป็นเวลา 8 นาที ล้างตัวอย่างด้วยบัฟเฟอร์ 1×PBS 2-3 ครั้งเป็นเวลา 30 s-1 นาทีในแต่ละครั้ง

5. การปิดผนึก: หลังจากที่ส่วนต่างๆ เขย่าให้แห้งเล็กน้อย ให้หยดยาปิดผนึกป้องกันแสงฟลูออเรสเซนซ์หนึ่งหยดลงในตัวอย่างแล้วปิดผนึกด้วยแผ่นปิดที่เหมาะสม

[บันทึก]ขั้นตอนที่ 4 และ 5 สามารถแทนที่ได้ด้วยเครื่องปิดผนึกป้องกันการเรืองแสงที่ประกอบด้วย DAPI (คำแนะนำ G1407) ซึ่งช่วยให้เกิดการย้อมสีนิวเคลียสและการปิดผนึกฟิล์มได้สำเร็จในเวลาเดียวกัน

6. กล้องจุลทรรศน์: กล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนซ์หรือกล้องจุลทรรศน์เลเซอร์คอนโฟคอลเพื่อสังเกตผลลัพธ์ โดยเลือกช่องสัญญาณ 488 (Ex/Em=493/517 nm) และ DAPI (Ex/Em=364/454 nm)

 

 

1. ตัวอย่างที่ได้รับการแก้ไขเป็นเวลานาน (เช่น ส่วนพาราฟิน) จะต้องผ่านกระบวนการซ่อมแซมไพโรไลซิส มิฉะนั้นผลลัพธ์ที่เป็นบวกจะอ่อนหรือใกล้เคียงเลย

2. การย้อมสี WGA สำหรับการวิเคราะห์กล้ามเนื้อหัวใจต้องใช้เนื้อเยื่อกล้ามเนื้อหัวใจในระดับสูง ซึ่งจะต้องสมบูรณ์และเป็นเนื้อเดียวกัน และวิธีที่ดีที่สุดคือจัดเตรียมตัวอย่างส่วนพาราฟิน

3. สำหรับตัวอย่างเซลล์ หลีกเลี่ยงการใช้สารละลายที่ซึมผ่านได้ก่อนการย้อมสี เนื่องจากอาจทำให้เกิดการย้อมสีส่วนประกอบโครงสร้างไซโตพลาสซึม

4. สีย้อมฟลูออเรสเซนต์อาจมีการดับและขอแนะนำให้ทำการทดสอบและภาพถ่ายการสังเกตให้เสร็จสิ้นโดยเร็วที่สุดหลังจากการย้อมสี

5. กรุณาสวมเสื้อกาวน์และถุงมือระหว่างการปฏิบัติงาน

 

สำหรับใช้ในการวิจัยเท่านั้น!

เวอร์ชัน เลขที่.:V1.0-202403

 

 

ป้ายกำกับยอดนิยม: ถ้า488-แอกกลูตินินจมูกข้าวสาลี（wga,ไฟเขียว）, ประเทศจีน ถ้า488-แอกกลูตินินจมูกข้าวสาลี（wga,ไฟเขียว） ผู้ผลิต ซัพพลายเออร์ โรงงาน